Základní principy analytických metod

Antigeny  (Ag) jsou látky, které jsou schopny vyvolat v živém organismu, pro který jsou látkou cizorodou, tvorbu specifických protilátek. Nekompletní antigen (hapten) vyvolá tvorbu protilátek pouze v případě, je-li navázán na bílkovinný nosič (hapteny – léčiva, hormony, steroidy, izolované determinantní skupiny antigenu)

Protilátky (Ab) – bílkoviny vykazující specifickou vazebnou aktivitu vůči antigenu na jehož podnět se vytvořily (imunoglobuliny).Jsou tvořeny aktivovanými B-lymfocyty (plazmocyty). 

Antiséra – komerčně vyrobené protilátky (imunizace zvířat)

Polyvalentní antiséra – protilátky proti mnoha bílkovinám.

Monovalentní antiséra – protilátky proti jedné stanovované bílkovině.

Polyklonální protilátky – heterogenní směs proti jednotlivým skupinám (epitopům) antigenu a jsou tvořeny mnoha klony B lymfocytů, z hlediska svých vlastností jsou heterogenní. Příprava- imunizací zvířat (příprava čistého antigenu, jeho konjugace imunizace a odběr antiséra).

Monoklonální protilátky – reagují pouze proti jedné antigenní determinantní skupině antigenu, produkt jednoho klonu B lymfocytů, jsou naprosto homogenní a přísně specifické proti jedinému epitopu. Vhodný nástroj přesné diagnostiky. 

Kompetitivní (soutěživé) - antigen a značený antigen soutěží o místa na protilátce, která je v limitovaném množství, ne na každý antigen a značený antigen se dostane.Měříme-li signál značky vázané v imunokomplexu Ab-Ag^M je naměřená hodnota nepřímo úměrná koncentraci stanoveného antigenu.

Nekompetitivní (nesoutěživé) - při stanovení antigenu je specifická protilátka v nadbytečném množství, značená druhá protilátka je rovněž v nadbytku. Hladina měřeného signálu je přímo úměrná stanovovanému antigenu.

Homogenní metody - volný značený antigen, nebo značená protilátka mají odlišné fyzikálně-chemické vlastnosti od stejně značeného antigenu nebo značené protilátky vázané v imunokomplexu antigen-protilátka. Při měření signálu této vlastnosti nemusíme oddělovat volné značené složky od těchto složek vázaných v imunokomplexech.

Heterogenní metody -.vazbou do imunokomplexu se měřené  vlastnosti, nebo chování, nemění a v analytickém postupu je vždy vložen separační krok na oddělení značených volných a vázaných komponent imunochemické reakce. 

Obr. 27  Schema kompetitivního stanovení antigenu.(Ag). V případě, že měříme hodnotu signálu, kterou dává zesilující prvek v poli 1, jde o nepřímou úměru, čím více stanovovaného antigenu, tím menší signál (zesilovací prvek označený hvězdičkou může být enzym, fluorofor,luminiscenční značka, izotop). Značený antigen v poli 2 musíme u heterogenních metod odstranit. Protilátka Ab je v limitovaném množství. Toto je základní schema, provedení  může být různé.

Obr. 28 Nekompetitivní stanovení antigenu. Obě protilátky jsou v nadbytečném množství, antigen má pro ně dvě různá vazebná místa. Přebytek protilátek v poli 2 je odstraněn, signál je přímo úměrný stanovovanému antigenu. Opět jde pouze o jeden příklad z řady jiných možností uspořádání