Zpracování a využití biologického materiálu pro výzkumné účely od nemocných s monoklonální gamapatií - Ing. Martina Almáši, Ph.D.

Pro selekci plazmatických buněk (PB) je kostní dřeň (10-40 ml) odebrána do heparinu a ihned smíchána s transportním médiem v poměru 1:1 obsahujícím IMDM médium (Iscove´s Modified Dulbeccoś Medium, Sigma-Aldrich). Ze vzorku kostní dřeně určeného k selekci plazmatických buněk se nejprve oddělují mononukleární buňky denzitní gradientovou centrifugací na Ficoll-Plaque Plus (Scintila). Obrázek znázorňuje navrstvení prstence mononukleárních buněk na denzitní gradientové médium Ficoll, pod tímto médiem zůstanou červené krvinky a granulocyty. Následují procesy jako promytí, odstředění, spočítání mononukleárních buněk a vzorek je odeslán do flowcytometrické laboratoře ke stanovení infiltrace plazmatických buněk, tedy stanovení procenta plazmatických buněk CD38+138+. Poté je provedena separace PB.

Separační techniky jsou založeny na použití monoklonálních protilátek, které jsou v případě magnetické separace (MACS) konjugovány s paramagnetickou partikulí a v případě fluorescenčního sortování buněk (FACS) je monoklonální protilátka konjugována s fluorochromem.