Nález sférocytů v krevním nátěru není specifický pro HS, přestože tyto jsou u pacientů přítomny, a je tedy zapotřebí využít dalších přístupů např. vyšetření osmotické rezistence či autohemolýzy. Také tyto testy však nemusí diagnózu HS potvrdit, proto se v současnosti využívá zejména test kryohemolýzy (relativně dostupný na každém pracovišti) či vyšetření pomocí průtokové cytometrie (pouze ve specializovaných laboratořích). V případě kryohemolýzy se vychází z faktu, že erytrocyty pacientů s HS jsou fragilnější a snáze při změnách teploty v hypertonickém prostředí podléhají hemolýze. Průtoková cytometrie pak k testování vad v erytrocytární membráně používá eosin maleimidovou kyselinu (EMA), která se kovalentně váže na Lys-430 proteinu band 3 a po excitaci modrým světlem (λ = 488 nm) zeleně fluoreskuje. Defekty v proteinu band 3 způsobují snížení intenzity fluorescence, což lze detekovat v kanále FL1 (λ = 525 nm). Ve srovnání s kontrolním vzorkem pak u pacienta s HS lze pozorovat snížení mediánu intenzity fluorescence (MFI) navázané EMA (viz. obr. č. 1).
Obr. č. 1. Srovnání MFI u buněk značených EMA. U pacienta s podezřením na HS (červeně; MFI P) je patrné významné snížení MFI vzhledem ke kontrolnímu vzorku periferní krve (modře; MFI K).
Test na průkaz HS s využitím průtokové cytometrie byl na Oddělení klinické hematologie FN Brno zaveden na sklonku roku 2010, přičemž bylo využito pracovního postupu z dostupné literatury. V roce 2011 pak byla na pracovišti zpracována a vyšetřena periferní krev 31 dětských pacientů (spolu s věkově odpovídajícími kontrolními vzorky), kdy u 17 pacientů byla v rámci erytrocytů zjištěna snížená intenzita fluorescence navázené EMA, a tedy bylo splněno jedno z kritérií HS. Tento test také dokázal odhalit přítomnost patologických HS erytrocytů na pozadí transfundovaných normálních erytrocytů (viz obr. č. 2).
Obr. č. 2. Nález 2 populací erytrocytů u pacienta. Kontrolní vzorek (modře; MFI K) má téměř shodný MFI jako vzorek pacienta s potvrzenou HS (červeně; MFI P) po transfuzi. Červenou šipkou je u pacienta naznačena populace se sníženou intenzitou MFI, které odpovídá patologických HS erytrocytům, zatímco zbylé transfundované erytrocyty mají MFI odpovídající normálu.
Průtoková cytometrie tedy poskytuje přímý test s vysokou diagnostickou senzitivitou a specifičností a spolu s kryohemolýzou patří mezi doporučené screeeningové testy. Nevýhodou je dostupnost pouze na vybraných pracovištích disponujících průtokovým cytometrem.
Literatura:
King MJ et al. Rapid flow cytometric test for the diagnosis of membrane cytoskeleton-associated haemolytic anaemia. Br J Haematol. 2000;111(3):924-933Bolton-Maggs PH, Langer JC, Iolascon A, Tittensor P, King MJ. Guidelines for the diagnosis and management of hereditary spherocytosis--2011 update. Br J Haematol. 2012;156(1):37-49
Bianchi P, Fermo E, Vercellati C, Marcello AP, Porretti L, Cortelezzi A, Barcellini W, Zanella A. Diagnostic power of laboratory tests for hereditary spherocytosis: a comparison study on 150 patients grouped according to the molecular and clinical characteristics. Haematologica. 2011. [Epub ahead of print]
Tato prezentace ja také k dispozici ve verzi pro:
| Tisk |
 |
Jak citovat toto dílo? (údaje kurzívou doplňte sami)
Mgr. Lucie Říhová, Ph.D.: Diagnostika hereditární sférocytózy s využitím průtokové cytometrie. PO>STUDIUM [online] 7. 2. 2012, poslední aktualizace 7. 2. 2012 [cit. aktuální datum]. Dostupný z WWW: https://postudium.cz/mod/forum/discuss.php?d=589. ISSN 1803-8999